Tenkovrstvá chromatografie je metoda chemické analýzy založená na použití vrstvy sorbentu o tloušťce 0,1 - 0,5 mm jako stacionární fáze. Metodu TLC lze použít v různých oblastech a umožňuje stanovení široké škály chemických sloučenin.
Princip metody
Metoda tenkovrstvé chromatografie se zrodila z papírové chromatografie a první experimenty byly provedeny v 80. letech 19. století. Aktivní využívání této analýzy začalo až po roce 1938.
Technika TLC zahrnuje mobilní fázi (eluent), stacionární fázi (sorbent) a analyt. Stacionární fáze je nanesena a upevněna na speciální desce. Deska může být vyrobena ze skla, hliníku nebo plastu - jedná se o opakovaně použitelné podklady, které je třeba po každém použití důkladně umýt, vysušit a připravit na aplikaci sorbentu. Je také možné použít papírové desky, které se po použití zlikvidují.
Jako stacionární fáze se nejčastěji používá silikagel, ale je možné použít i jiné sorbenty, například oxid hlinitý. Při použití tohoto nebo toho sorbentu je nutné přesně dodržovat technologii, aby byl výsledek přesný, například proto, že silikagel může poskytnout nesprávný výsledek, pokud je vzduch v laboratoři příliš vlhký.
Jako mobilní fáze se používají rozpouštědla, například voda, kyselina octová, ethanol, aceton, benzen. Volba rozpouštědla musí být přijata odpovědně, protože výsledek chromatografie přímo závisí na jeho kvalitách (viskozita, hustota, čistota). Pro každý analyzovaný vzorek je vybráno individuální rozpouštědlo.
Analýza
Vzorek musí být naředěn v rozpouštědle. Pokud nedojde k úplnému rozpuštění a zůstane příliš mnoho nečistot, lze vzorek vyčistit extrakcí.
Aplikace vzorku na desku lze provést automaticky nebo ručně. Automatická aplikace používá metodu mikrospreje, kdy se každý vzorek nastříká na příslušnou oblast podkladu. Pro manuální aplikaci se používá mikropipeta. Značky tužky jsou umístěny na destičku pro každý vzorek. Každý vzorek se nanese kapilárou na destičku v jedné linii v dostatečné vzdálenosti od značek, aby nereagoval s uhlíkem z olova.
Destička se umístí do nádoby, na jejíž dno se nalije eluent. Podpora je umístěna s jedním okrajem do cévy až po vyznačenou čáru. Nádoba je pevně uzavřena, aby se zabránilo odpařování mobilní fáze. Působením kapilárních sil začne eluent stoupat do vrstvy sorbentu. Když eluent dosáhne určité úrovně, destička se vyjme z nádoby a vysuší se.
Pokud požadovaná látka nemá žádnou barvu, nebude na podkladu viditelná. Proto se provádí vizualizace - zpracování desky parami jódu nebo jinými barvivy.
Po takovém zpracování se vyhodnotí výsledek. Na sorbentu se objevují barevné oblasti různé intenzity. Pro stanovení látky (nebo skupiny látek) jsou barevné plochy, jejich velikost, intenzita a mobilita porovnány s referenčním vzorkem.
Metoda TLC je široce používána, protože je rychlá, levná, přesná, intuitivní, nevyžaduje složité vybavení a je snadno interpretovatelná.
